洗滌方法：

1. 自動(dong)洗(xi)板機(ji)：每孔加入洗(xi)滌液350μl，注(zhu)入與吸出(chu)間隔60秒(miao)。洗(xi)板5次(ci)。

2. 手工洗板(ban)：甩盡孔內液(ye)體，在(zai)潔(jie)凈(jing)的(de)吸水紙上拍干，每(mei)孔加(jia)洗滌液(ye)350μl，浸泡1-2分(fen)鐘，吸去(不可觸及板(ban)壁)或甩掉酶(mei)標(biao)板(ban)內的(de)液(ye)體，在(zai)厚的(de)吸水紙上拍干。洗板(ban)5次。

實驗開始前，各試劑(ji)均應平衡至室溫(wen)；試劑(ji)或樣品(pin)配制時，均需充分(fen)混勻，并盡量避免起泡。

1.加(jia)樣(yang)(yang)：分別設(she)空白孔、標(biao)準(zhun)孔、待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)孔。空白孔加(jia)樣(yang)(yang)品(pin)稀釋液100μl，余孔分別加(jia)標(biao)準(zhun)品(pin)或待測(ce)樣(yang)(yang)品(pin)100μl，注意不要有(you)氣泡(pao)，加(jia)樣(yang)(yang)時(shi)將樣(yang)(yang)品(pin)加(jia)于酶標(biao)板(ban)底部(bu)，盡量不觸(chu)及孔壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。給酶標(biao)板(ban)覆膜，37℃孵育2小(xiao)時(shi)。為保證實驗(yan)結果有(you)效性，每次實驗(yan)請使(shi)用新的標(biao)準(zhun)品(pin)溶液。

2.棄去液體，甩干，每個孔中加(jia)(jia)入(ru)Detection Ab工作液 100μl(在(zai)使用前15分(fen)鐘(zhong)內配(pei)制(zhi))，酶標(biao)板加(jia)(jia)上(shang)覆膜，37℃溫(wen)育1小時。

3.棄(qi)去(qu)孔內(nei)液(ye)體，甩(shuai)干，洗(xi)板 3次(ci)，每(mei)次(ci)浸泡1-2分鐘，大約350μl /每(mei)孔，甩(shuai)并在吸(xi)水紙上輕拍將孔內(nei)液(ye)體拍干。

干4.每孔加HRP Conjugate工作(zuo)液(臨用(yong)前15分(fen)鐘內配制)100μl，加上覆膜，37℃溫育1小時。

5.棄去孔內液體，甩干(gan)，洗板5次，方法(fa)同步驟3。

6.每孔(kong)加底物溶(rong)液100μl，酶標板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左(zuo)右(根據實際顯色情況酌情縮短或延長，但(dan)不(bu)可(ke)超過30分鐘。當標準孔(kong)出現明(ming)顯梯度(du)時，即可(ke)終止(zhi))。

7.每孔加終(zhong)止(zhi)液(ye)50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應，此(ci)時(shi)藍色立轉(zhuan)黃色。終(zhong)止(zhi)液(ye)的加入順序應盡(jin)量與底物液(ye)的加入順序相同(tong)。

8.立即用(yong)酶(mei)標儀在450nm波長測量(liang)各孔(kong)的光(guang)密度(OD值)。應提(ti)前打開酶(mei)標儀電源，預熱儀器，設置(zhi)好檢(jian)測程序(xu)。

9.實驗完畢后(hou)將未用完的(de)試劑(ji)按規(gui)定的(de)保存溫度放回冰箱(xiang)保存至有效(xiao)期結(jie)束。