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產品名稱(cheng)：小(xiao)鼠(shu)腎小(xiao)球內皮細胞
英(ying)文簡稱：MGECs細胞

貨號：LZ-X969980
規格：T25
生長特性：貼(tie)壁

凍存培養基：
凍存細胞時必須(xu)使(shi)用(yong)推(tui)薦(jian)的凍存培(pei)養基(ji)。凍存培(pei)養基(ji)中(zhong)應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1）細胞(bao)凍(dong)存(cun)培養(yang)(yang)基(ji)是一種(zhong)用于哺乳動(dong)物(wu)細胞(bao)的即用型*凍(dong)存(cun)培養(yang)(yang)基(ji)，其所含胎牛血清(qing)和牛血清(qing)比例經過優化(hua)，可(ke)改善細胞(bao)活力(li)以(yi)及解凍(dong)后的細胞(bao)復(fu)蘇效果。 
2）凍(dong)存培養(yang)基是一種化學(xue)成分(fen)確定(ding)的(de)、無蛋白(bai)、無菌凍(dong)存培養(yang)基，含10% DMSO，適用(yong)于多種干(gan)細胞和原代細胞 (黑(hei)色素細胞除外) 的(de)凍(dong)存。
培(pei)養細胞凍(dong)存方案：
以下實(shi)(shi)驗方案(an)(an)介(jie)紹了(le)培養細胞(bao)凍存的一(yi)般流程。詳細的實(shi)(shi)驗方案(an)(an)，必須參閱針(zhen)對具體細胞(bao)的產品說明書(shu)。 
1.配制凍存培養基，于2°C至8°C下(xia)儲存，直至使用(yong)。請注意使用(yong)何種(zhong)凍存培養基取決于所(suo)用(yong)細胞系。
2.凍存貼壁細胞(bao)時，利用(yong)(yong)(yong)傳代時所(suo)用(yong)(yong)(yong)方法輕柔地使細胞(bao)從組織(zhi)培養(yang)容(rong)器上脫離下來。用(yong)(yong)(yong)該細胞(bao)所(suo)需(xu)*培養(yang)基重新懸(xuan)浮細胞(bao)。
3.采用、細(xi)(xi)胞(bao)計數儀按(an)照臺盼藍拒染法或者使用自動細(xi)(xi)胞(bao)計數儀測定總細(xi)(xi)胞(bao)數和活細(xi)(xi)胞(bao)百分比。根據(ju)所(suo)需(xu)(xu)活細(xi)(xi)胞(bao)密度，計算凍存(cun)培養(yang)基(ji)需(xu)(xu)要量。
4.以(yi)大(da)約100-200×g的離(li)心力(li)將細(xi)胞(bao)懸液(ye)離(li)心5至10分鐘。在無菌條件下小(xiao)心倒掉(diao)上清液(ye)，不要攪動細(xi)胞(bao)沉淀。
注：離心速度和時間(jian)取(qu)決(jue)于細胞種類。
5.用預冷的(de)凍存培養基重新(xin)懸浮(fu)細(xi)胞(bao)沉淀，將其調整至該細(xi)胞(bao)適合的(de)活細(xi)胞(bao)密度。
6.將細(xi)胞懸液分裝到若干凍存管(guan)中。分裝時(shi)，應不(bu)時(shi)輕(qing)輕(qing)混合細(xi)胞，使其(qi)保持均勻的(de)細(xi)胞懸液狀態。
7.使(shi)用(yong)可控制降(jiang)(jiang)溫(wen)速度(du)的(de)冷凍裝(zhuang)置冷凍細(xi)胞(bao)，使(shi)溫(wen)度(du)每分鐘大(da)約降(jiang)(jiang)低  1°C。或(huo)者，將裝(zhuang)有細(xi)胞(bao)的(de)凍存(cun)(cun)管放(fang)入凍存(cun)(cun)盒中(zhong)，然后將凍存(cun)(cun)盒置于(yu)-80°C條件下過夜。

實(shi)驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yang)液1瓶(ping)；8ml小牛(niu)血清（FCS) 1瓶(ping)；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶(ping)；PBS(-)1 瓶(ping) 
2. 100ml滅菌(jun)燒杯2個；
3、50ml離(li)心筒2個 
4、滅菌培養(yang)皿(min)1個，細胞(bao)培養(yang)瓶(ping)1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒(he)2個(ge)；無菌玻璃攪拌棒(bang)1個(ge) 
6、細胞計數板1塊(kuai)； 
7、滅(mie)好菌(jun)的鑷子1把(ba)，剪(jian)刀1把(ba)； 
8、酒精(jing)燈1臺；

實驗報告：
一、分離(li)與培養：
   1、無菌條(tiao)件下(xia)，取出1-3d 齡SD大(da)鼠心房組(zu)織(zhi)，然后用(yong)PBS將此組(zu)織(zhi)塊清洗2次，最后將組(zu)織(zhi)剪(jian)成1mm3左右(you)大(da)小；
   2、往(wang)組織塊中(zhong)加入4 mL酶(mei)消(xiao)化(hua)(hua)液（0.1% 胰酶(mei)和0.1% I型(xing)膠原酶(mei)），混懸10s，置(zhi)37℃條件下消(xiao)化(hua)(hua)10min，之后用滴管(guan)吹打制成單(dan)細胞懸液，自然沉淀(dian)并(bing)收集上清(qing)，用含10% FBS培(pei)養基終(zhong)止消(xiao)化(hua)(hua)后4℃放置(zhi)；
   3、剩下的(de)組(zu)織再加入3～4mL酶消化(hua)液(ye)，混(hun)懸(xuan)10s，置37℃消化(hua)10 min后，按上述(shu)方法收(shou)集上清并終止消化(hua)后4℃放(fang)置，重復此(ci)步驟2-3次(ci)，直至組(zu)織*被消化(hua)；
   4、用200目不(bu)銹鋼篩網過濾(lv)細胞消化液，1200r/min 離(li)心10min，棄去上清(qing)，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培(pei)養(yang)(yang)基混(hun)懸，接種(zhong)于25cm2培(pei)養(yang)(yang)瓶，放(fang)置于37℃ ，5％CO2 培(pei)養(yang)(yang)箱中(zhong)培(pei)養(yang)(yang)；
   5、差(cha)速(su)貼壁1h后，吸(xi)出培(pei)(pei)養基(ji)，按實驗(yan)需要(yao)接種(zhong)于(yu)6孔(kong)板(ban)中繼續培(pei)(pei)養；
二、免疫(yi)熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xi)胞生長至80%融合(he)時(shi)，棄去(qu)培(pei)養基，用溫(wen)(wen)育的PBS沖洗細(xi)胞2次，每次10min，然后用4%多(duo)聚(ju)甲醛(quan)在室(shi)溫(wen)(wen)條件下固定細(xi)胞15min；
   2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在(zai)4℃條件下，用0.1％Triton X-100透(tou)膜15min；
   3、PBS沖(chong)洗細胞2次(ci)(ci)，每次(ci)(ci)10min，然后在室(shi)溫條(tiao)件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4、按1: 100的比例(li)稀釋α-actin一抗(kang)，然后將其放(fang)在4℃冰箱中孵育細胞過夜(ye)；
   5、PBS沖洗(xi)細胞3次，每次10min，按(an)1：150的(de)比例稀釋抗α-actin的(de)二抗， 37℃條件下放置(zhi)1h；
   6、用PBS沖洗3次(ci)，每(mei)次(ci)10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖(tu)像并(bing)拍照。

Sorensen磷酸緩沖液(0.1mol/L,pH5.3-8.04)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒食(shi)子(zi)兒茶素(su)沒食(shi)子(zi)酸酯縮酶(mei)（ADOLASE）活性比色法定量檢測試劑盒

Sorensen磷酸緩沖液(1×,pH6.2)(-)-Epigallocatechin Gallate；表沒(mei)食子(zi)兒茶(cha)素沒(mei)食子(zi)酸酯染色質(zhi)免疫沉淀分析（CHIP）試(shi)劑盒

Sorensen磷酸緩沖液(10×,pH6.2)Epimedin A；朝藿定A染色質免疫沉淀分析（CHIP）*試劑盒（包括抗體(ti)）

TBS緩沖(chong)液(0.02mol/L,pH8.2)Epimedin A；朝(chao)藿(huo)定(ding)A人類巨病蛋(dan)白酶（HCMV PROTEASE）活性熒(ying)光淬滅法定(ding)量檢測試劑盒

TBS緩沖液(0.05mol/L,pH7.4)Epimedin B；朝(chao)藿定(ding)B人體鼻病(bing)（rhinovirus）定(ding)量(liang)PCR擴增(zeng)檢測試劑盒(he)

Tris-Maleate緩沖液(0.1mol/L,pH5.08-8.45)Epimedin B；朝藿定(ding)B人體(ti)鼻病(bing)（rhinovirus）定(ding)性檢測試劑盒

Tris-Maleate緩沖液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝(chao)藿定C人體腺病（adenovirus）定量PCR擴增檢測試(shi)劑盒(he)

Tris-Maleate緩(huan)沖(chong)液(1mol/L，pH5.0-8.5)Epmedin C；朝藿定C人體(ti)腺病（adenovirus）定性檢測試(shi)劑盒

阿拉伯膠水溶液(10%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體形態染色試劑盒

阿拉伯膠(jiao)水溶液(25%)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體型酸性磷酸酶總活性比色法定量檢測試劑盒

緩沖液(5×,pH7.4)Ezetimibe；依澤替米貝/依折麥布溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩(huan)沖(chong)液(ye)(pH7.4)Erythromycin；紅霉素溶酶體脂酶（酸性脂酶）活性染色試劑盒

鈉溶(rong)液(ye)(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE）總活性比色法定量檢測試劑盒

鈉(na)溶液(0.1mol/L)Erythromycin；紅霉素肉堿棕櫚酰轉移酶I（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測試劑盒

鈉緩(huan)沖液(0.1mol/L,pH8.6)Estradiol；β-雌二肉堿棕櫚酰轉移酶II（CARNITINE PALMITOYL－TRANSFERASE II）活性比色法定量檢測試劑盒
MGECs細胞XII B組磷脂(zhi)酶(mei)A2(PLA2G12B)酶(mei)聯免疫吸附(fu)測定試劑盒Human A1BG(Alpha-1B-glycoprotein) ELISA Kit人瘤病(bing)16型E7抗體(ti)

髓(sui)系(xi)觸發受體-1(TREM-1)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB1 ELISA Kit人類狀瘤病58 E6蛋白抗體

黑素轉鐵蛋(dan)白(bai)(MFI2)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SATB2(Special AT-rich sequence-binding protein 2) ELISA Kit人類狀瘤病16抗體

抗酸(suan)性(xing)磷酸(suan)酶(ACP5)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SBDS ELISA Kit人類狀瘤病18 E7抗體

甲狀(zhuang)腺(xian)原氨酸(Thyronine)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SA1 ELISA Kit人類狀瘤病31 E7抗體

脂聯素(ADP/Acrp30)酶聯免疫吸附測定試劑盒Human SCAP ELISA Kit轉錄因子HES2抗體

集(ji)聚蛋白(bai)(AGRN)酶聯免疫吸附測定試劑盒 Human SAPS3 ELISA Kit轉錄因子HES3抗體
注意事項：
     盡(jin)管經測(ce)試Annexin V-FITC反復凍融(rong)5次對于其檢測(ce)效果無(wu)顯著(zhu)影響，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存(cun)，并(bing)適(shi)當(dang)注意避免反復凍融(rong)。
     如果(guo)有細菌或真菌污(wu)染，會(hui)嚴重影響檢測效果(guo)。
     染色后宜盡快(kuai)檢測，時間(jian)過長可能會導致凋(diao)亡或壞死細胞的數量增加。
     如果(guo)細胞收集過程中使用了胰酶，需注意(yi)設法(fa)去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消(xiao)化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗(bai)。
     熒(ying)光物質均(jun)易發生淬滅，在(zai)進行熒(ying)光觀察時，盡量(liang)(liang)縮(suo)短觀察時間，同時在(zai)操作和存放過(guo)程中也(ye)盡量(liang)(liang)注意避(bi)光保(bao)存。
     用(yong)于流式細胞儀檢測時，如(ru)果發現(xian)Annexin V-FITC單獨(du)染色時出現(xian)了過多的(de)PI假陽性細胞，并且通(tong)過調整(zheng)相(xiang)關設置(zhi)和參數也無法改善，可(ke)(ke)以用(yong)PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測，這樣通(tong)常可(ke)(ke)以有效減少假陽性的(de)壞(huai)死細胞。
     需(xu)自備(bei)PBS。
     本產品(pin)于(yu)(yu)專業人員的科學研究用(yong)(yong)，不得用(yong)(yong)于(yu)(yu)臨床診(zhen)斷或(huo)治療，不得用(yong)(yong)于(yu)(yu)食(shi)品(pin)或(huo)藥品(pin)，不得存放于(yu)(yu)普(pu)通住宅內。
     為了您的安全(quan)和健康(kang)，請穿(chuan)實驗服(fu)并戴一次(ci)性手套操作(zuo)。