產品屬性：

需要(yao)而未提供的試(shi)劑和(he)器材：

1. 產品僅用于科(ke)研標(biao)準規格酶(mei)標(biao)儀(yi)

2. 高速離心機

3. 電(dian)熱恒溫培養箱(xiang)

4. 干凈的試管(guan)和Eppendof管(guan)

5. 系(xi)列可調節移液器(qi)及(ji)吸(xi)頭，一次檢測樣品較多時，用多通(tong)道移液器(qi)

6. 蒸餾水，容(rong)量瓶等。

標本要求：

1．標(biao)本采(cai)集(ji)后(hou)盡(jin)早進(jin)行提(ti)(ti)取(qu)，提(ti)(ti)取(qu)按相關文獻進(jin)行，提(ti)(ti)取(qu)后(hou)應盡(jin)快進(jin)行實驗。若不能馬上進(jin)行試(shi)驗，可將標(biao)本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．不能檢測含NaN3的(de)樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(de)（HRP）活性。

備試劑與收(shou)集血樣：

1.  收集標本：血(xue)清(qing)、血(xue)漿（EDTA 、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yang)上清(qing)液、組(zu)織勻漿等盡早檢(jian)測(ce)， 2-8 ℃ 保(bao)存48 小(xiao)時；更長時間須(xu)冷凍（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保(bao)存，避免反復(fu)凍融。

2.  標準品液(ye)配制：使用前加入(ru)0.5ml 蒸(zheng)餾水 混勻(yun)，配成 120 0ng/ml 的溶(rong)液(ye) 。 設(she)標準 管(guan)(guan) 8 管(guan)(guan)，管(guan)(guan)加標本稀(xi)釋液(ye) 900ul ，第(di)二至(zhi)第(di)八(ba)管(guan)(guan)加入(ru)標本稀(xi)釋液(ye) 500ul 。在管(guan)(guan)中加入(ru) 120 0ng/ml 的標準品溶(rong)液(ye) 100ul 混勻(yun)后用加樣器吸出(chu)(chu) 500ul ，移至(zhi)第(di)二管(guan)(guan) 。如(ru)此反復作對倍稀(xi)釋，從(cong)第(di)七 管(guan)(guan) 中吸出(chu)(chu) 500ul 棄去(qu)。第(di)八(ba) 管(guan)(guan) 為空(kong)白對照。

3.  10× 標本稀釋液用蒸餾水(shui)作 1: 1 0 倍稀釋（ 示例： 1ml濃(nong)稀釋液 +9ml 蒸餾水(shui)）。

4.  ;洗滌(di)液：用重(zhong)蒸水 1:20 稀釋（示(shi)例：1ml 濃縮洗滌(di)液加入 19ml 的重(zhong)蒸水）

檢測(ce)程序(xu)：

1.  加樣(yang)：每孔各加入標準品或待測樣(yang)品 100ul ，將反應板(ban)充分混勻(yun)后置 37 ℃ 120 分鐘。

2.  洗板(ban)：用(yong)洗滌液將反應板(ban)充分洗滌 4-6 次，向濾紙上印干。

3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反(fan)應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。

4.  洗板：同前。

5.  每孔加酶(mei)標抗體工作(zuo)液(ye)100ul 。將(jiang)反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。

樣本(ben)實驗前準(zhun)備：

ELISA進口(kou)試(shi)劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿(niao)液、胸腹水(shui)、腦(nao)脊液、細胞(bao)培養上(shang)清等。

（1）血清

室溫血液自然(ran)凝固10-20分鐘(zhong)后，離心(xin)(xin)20分鐘(zhong)左右(you)（2000-3000轉/分）。仔細收集(ji)上清(qing)。保存過(guo)程(cheng)中如(ru)有沉淀(dian)形成(cheng)，應再次離心(xin)(xin)。

（2）血漿：

應(ying)根(gen)據標本的要(yao)求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑(ji)，混合10-20分鐘(zhong)(zhong)后，離心(xin)20分鐘(zhong)(zhong)左右（2000-3000轉/分）。仔細收(shou)集上(shang)清。保存過程中如有沉淀形成，應(ying)再次離心(xin)。

（3）尿液：

用(yong)無菌管收集(ji)。離(li)(li)心(xin)20分鐘(zhong)左右（2000-3000轉/分）。仔細收集(ji)上清。保存過(guo)程中如有沉淀(dian)形成，應再次離(li)(li)心(xin)。胸腹水、腦脊液參照(zhao)此實行。

（4）細胞培養(yang)上清：

檢(jian)測分(fen)泌性的(de)成份時(shi)，用無菌管收集(ji)。離心(xin)20分(fen)鐘左右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收集(ji)上清。

（5）培養細胞

檢測(ce)細(xi)(xi)胞內的成份(fen)時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xi)(xi)胞懸液，細(xi)(xi)胞濃度達到100萬/ml左右。通過(guo)反復凍(dong)融或加入組織(zhi)蛋白萃取(qu)試(shi)劑，以(yi)使細(xi)(xi)胞破壞并放(fang)出細(xi)(xi)胞內成份(fen)。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細(xi)(xi)收(shou)集(ji)上清。保存過(guo)程中(zhong)如有沉淀形成，應(ying)再次(ci)離心。

（6）組織標本

切割標本后，稱取(qu)重量。加入一定量的(de)(de)PBS，PH7.4。用(yong)液(ye)氮迅(xun)速冷凍(dong)(dong)保存備用(yong)。標本融化后仍然保持2-8℃的(de)(de)溫度。加入一定量的(de)(de)PBS（PH7.4），或組織蛋白萃(cui)取(qu)試劑, 用(yong)手工或勻(yun)漿器將標本勻(yun)漿化。離(li)心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍(dong)(dong)備用(yong)。

Phospho-ATP1A1 (Ser16)    磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體

Acetyl CoA Carboxylase    乙酰羧化酶抗體(ti)

Phospho-Acetyl Coenzyme A carboxylase alpha (Ser78)    磷酸化(hua)乙酰羧化(hua)酶(mei)抗(kang)體

Phospho-Ack1 (Tyr859 + 860)    磷(lin)酸化Ack1抗體

phospho-AMPK alpha-1(Ser485+Ser491)    磷酸化(hua)腺苷單(dan)磷酸活化(hua)蛋白激(ji)酶α1抗體

phospho-AMPK beta 1 (Ser108)    磷(lin)酸(suan)化腺苷單磷(lin)酸(suan)活(huo)化蛋(dan)白激酶β1抗體

phospho-ALK (Tyr1604)    磷(lin)酸化(hua)間變型(xing)淋巴瘤激(ji)酶抗(kang)體

phospho-ATM(Ser1981)    磷酸化毛細血管擴(kuo)張性(xing)共濟失(shi)調癥(zheng)突變蛋白抗體

phospho-ATP citrate lyase (Ser455)    磷酸化三磷酸腺檸檬酸裂解酶抗體

phospho-ATR (Ser428)    磷(lin)酸化ATR抗體

AMN1    細胞(bao)核重定位及(ji)紡錘體(ti)檢查(cha)點蛋白AMN1抗體(ti)

ALG11    天連接(jie)糖基化11抗體

ASF1A    細胞衰老相關蛋白(bai)ASF1A抗體

AGPHD1    氨(an)基糖苷(gan)類磷酸結構域(yu)蛋白抗體

ASGPR1    唾液酸糖(tang)蛋白受體1抗體

ARSF    芳(fang)香基硫酸酯酶F抗體(ti)    NE-B重酒石酸ISA試劑盒    NE-B ELISA Kit    48T/96T

TAF腫(zhong)瘤血管(guan)生長因子ELISA試(shi)劑盒    TAF ELISA Kit    48T/96T

TAA腫瘤(liu)相(xiang)關抗原ELISA試(shi)劑盒    TAA ELISA Kit    48T/96T

TSTA腫瘤特異性(xing)移(yi)植抗原ELISA試劑盒(he)    TSTA ELISA Kit    48T/96T

TSGF腫瘤特異性生長因子(zi)ELISA試劑盒    TSGF ELISA Kit    48T/96T

TSA腫瘤特(te)異性抗原(yuan)ELISA試劑(ji)盒    TSA ELISA Kit    48T/96T

TGSF腫(zhong)(zhong)瘤特異生長因子(zi)/腫(zhong)(zhong)瘤相關(guan)因子(zi)ELISA試劑盒    TGSF ELISA Kit    48T/96T

TNFAIP6腫瘤壞死因(yin)(yin)子(zi)誘導(dao)基因(yin)(yin)6蛋白(bai)ELISA試(shi)劑盒    TNFAIP6 ELISA Kit    48T/96T

TWEAK腫(zhong)瘤(liu)壞死因子相關弱凋(diao)亡誘導因子ELISA試劑盒    TWEAK ELISA Kit    48T/96T

TRANCE腫(zhong)瘤壞死(si)因子相關(guan)激活誘導因子ELISA試(shi)劑(ji)盒    TRANCE ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫瘤壞死因子相(xiang)關(guan)凋(diao)亡誘(you)導配體受體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R2/DR5腫瘤(liu)壞(huai)死因子(zi)相(xiang)關凋(diao)亡誘(you)導配(pei)體(ti)受體(ti)2ELISA試劑盒    TRAIL-R2 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R4腫瘤壞死因子相關凋亡(wang)誘導配(pei)體4ELISA試劑盒    TRAIL-R4 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R3腫(zhong)瘤壞死因子相關凋(diao)亡誘導配體3ELISA試劑盒    TRAIL-R3 ELISA Kit    48T/96T

TRAIL-R1腫瘤壞死因(yin)子相關凋亡誘導配(pei)體1ELISA試劑盒(he)    TRAIL-R1 ELISA Kit    48T/96T

TRAF6腫瘤壞死因子(zi)受(shou)體相關因子(zi)6ELISA試劑盒  ;  TRAF6 ELISA kit    48T/96T

TRAF1腫瘤壞死因子受體相關(guan)因子1ELISA試(shi)劑盒    TRAF1 ELISA kit    48T/96T

TNFRSF18腫瘤壞死因(yin)子受體超家(jia)族成員18ELISA試劑(ji)盒    TNFRSF18 ELISA KIT    48T/96T

TNFsR-Ⅱ腫瘤壞死因子可溶(rong)性(xing)受體(ti)ⅡELISA試劑盒    TNFsR-Ⅱ ELISA Kit     48T/96T

TNFsR-Ⅰ腫(zhong)瘤壞死(si)因子可溶(rong)性受體ⅠELISA試劑(ji)盒    TNFsR-ⅠELISA Kit     48T/96T

TL1A/TNFSF15腫瘤壞死因子超(chao)家族(zu)15ELISA試劑(ji)盒(he)    TL1A/TNFSF15 ELISA Kit    48T/96T

TBA總膽汁酸ELISA試劑盒腫瘤壞死因子γELISA試劑盒    TNFγ ELISA Kit    48T/96T

TNFβ腫瘤壞死因子βELISA試劑盒(he)    TNFβ ELISA Kit    48T/96T

TACE腫瘤(liu)壞死(si)因子(zi)α轉(zhuan)化酶ELISA試劑盒    TACE ELISA Kit    48T/96T

操作步驟：

1.標(biao)準(zhun)品的(de)稀釋：本試(shi)劑盒提供原(yuan)倍標(biao)準(zhun)品一支，用戶可(ke)按照下列圖表在小試(shi)管(guan)中進行稀釋。

2.加樣(yang)(yang)(yang)：分別設(she)空(kong)白(bai)孔(kong)（空(kong)白(bai)對照孔(kong)不加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)及酶標試劑(ji)，其(qi)余(yu)各步操作相(xiang)同）、標準(zhun)孔(kong)、待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)。在酶標包被板(ban)上標準(zhun)品(pin)(pin)(pin)準(zhun)確加樣(yang)(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)孔(kong)中先加樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)稀釋液40μl，然后再加待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)最終稀釋度為5倍）。加樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)(pin)加于酶標板(ban)孔(kong)底部，盡量不觸及孔(kong)壁，輕輕晃動混勻。

3.溫(wen)育：用封(feng)板膜封(feng)板后置37℃溫(wen)育30分鐘。

4.配液：將30倍濃縮(suo)洗滌液用(yong)蒸餾(liu)水30倍稀釋(shi)后(hou)備用(yong)。

5.洗(xi)滌(di)：小(xiao)心揭掉封板膜，棄(qi)去液(ye)體(ti)，甩(shuai)干，每(mei)孔加滿(man)洗(xi)滌(di)液(ye)，靜(jing)置30秒后棄(qi)去，如此重復5次(ci)，拍干。

6.加酶：每(mei)孔加入(ru)酶標試(shi)劑(ji)50μl，空(kong)白孔除外(wai)。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯(xian)(xian)(xian)色：每(mei)孔先加(jia)(jia)入顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)A50μl，再(zai)加(jia)(jia)入顯(xian)(xian)(xian)色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯(xian)(xian)(xian)色15分鐘。

10. 終(zhong)(zhong)止：每孔(kong)加(jia)終(zhong)(zhong)止液50μl，終(zhong)(zhong)止反應（此(ci)時藍色(se)(se)立轉黃色(se)(se)）。

11. 測定(ding)：以(yi)空白空調(diao)零(ling)，450nm波長依序測量各孔(kong)的吸光度（OD值）。 測定(ding)應在加終(zhong)止液后15分鐘以(yi)內進行。